肺炎克雷伯菌毒力系统分析方法与思路

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课程简介

毒力因子（Virulencefactors,VFs）是影响病原菌致病性和宿主感染病症的重要因素，它不仅与细菌的侵袭性密切相关，还可能有助于保护细菌免受外界因素的伤害，并更好地适应环境。因此，在流行病学分析中，毒力因子是研究的重点项目之一。

本套课程是肺炎克雷伯菌毒力分析的综合指南。该课程首先要让大家明确病原菌的致病性与其毒力的关系。并认识到高毒力肺炎克雷伯菌（hvKp）和经典肺炎克雷伯菌（cKp）在毒力因子携带上所表现的差异。然后在理解肺炎克雷伯菌各项毒力因子的结构、生物学功能和合成调控机制的基础上，进一步明确毒力因子/毒力基因研究对于肺炎克雷伯菌，特别是hvKp致病性的意义。同时结合毒力因子预测和毒力实验，让大家知道应该如何展开对肺炎克雷伯菌毒力的研究和分析。

课程内容简介

（1）肺炎克雷伯菌的重要毒力因子荚膜多糖、脂多糖、铁载体和菌毛及其它毒力因子的结构、生物学功能、合成调控等专题讲解；

（2）肺炎克雷伯菌的模式毒力质粒遗传结构解读；

（3）毒力因子及毒力基因的常用预测方法介绍及其预测结果解读；

（4）肺炎克雷伯菌在毒力分析方面的研究思路指南；

（5）肺炎克雷伯菌常见的毒力实验方法介绍。

课程包含

（1）18个课时；

（2）理论介绍+预测方法+分析思路+实验方法；

（3）毒力因子预测的示例数据及部分示例结果。

课程目录

第一部分：肺炎克雷伯菌毒力因子的分类介

课时1：肺炎克雷伯菌的毒力因子总览

（1）病原菌的致病性概述；

（2）毒力因子的种类及主要作用；

（3）肺炎克雷伯菌中常见的毒力因子及其与可移动元件的关系；

（4）肺炎克雷伯菌中毒力因子的研究热点及方法。

课时2：荚膜多糖（CPS）的主要生物学功能及合成基因簇

（1）荚膜多糖的结构；

（2）荚膜多糖的主要生物学功能；

（3）荚膜多糖的致病机制；

（4）荚膜多糖合成相关基因；

（5）荚膜多糖的合成调控；

（6）荚膜多糖与血清型的关系。

课时3：脂多糖（LPS）的主要生物学功能及合成基因簇

（1）脂多糖的概念及其结构特征；

（2）脂多糖的主要生物学功能和致病性；

（3）脂多糖合成的相关基因及基因簇；

（4）脂多糖的合成过程及转移途径；

（5）脂多糖的调控作用；

（6）脂多糖与血清型的关系。

课时4：铁载体与毒力的关系及合成基因簇

（1）铁载体的概念及生物学意义；

（2）铁载体的类型；

（3）肺炎克雷伯菌中常见的铁载体及合成基因簇；

（4）铁载体的调控机制；

（5）铁载体介导的药物传递。

课时5：菌毛的类型及其与毒力的关系

（1）菌毛的概念-如何区分fimbriae和plii；

（2）fimbriae的类型；

（3）肺炎克雷伯菌的常见fimbriae及其对毒力的影响；

（4）type 1 fimbriae和type 3 fimbriae的遗传基础和调控机制；

课时6：肺炎克雷伯菌的其它毒力因子

（1）Colibactin的毒力及其基因簇；

（2）AcrAB外排泵介导抗生素耐药性和毒力；

（3）T6SS-PLD1和Tle1KP介导的毒力；

（4）Allantoin代谢与毒力的关系；

（5）外膜囊泡参与毒力传递；

课时7：肺炎克雷伯菌的毒力质粒KPVP

（1）肺炎克雷伯菌毒力质粒分类；

（2）KpVP-1型质粒解析；

（3）KpVP-2型质粒解析；

（4）KpVP的移动性及其与耐药基因的重组；

第二部分：肺炎克雷伯菌研究方法与思路

课时8：毒力因子预测实战—以肺炎克雷伯菌为例

（1）常用分析方法介绍；

（2）VFDB预测实战；

（3）VFDB数据库使用；

（4）VRprofile预测实战；

课时9：毒力质粒和毒力簇的分析方法概述

（1）表型实验确定菌株的毒力水平和毒力因子的影响；

（2）特征性热图分析毒力因子与菌株的内在联系；

（3）比较基因组圈图展示毒力基因的基因组分布；

（4）比较基因簇分析毒力基因簇的组成和演变；

课时10：肺炎克雷伯菌毒力研究的一般思路及案例分享

（1）肺炎克雷伯菌毒力的一般分析思路；

（2）肺炎克雷伯菌毒力因子的流行性研究；

（3）肺炎克雷伯菌毒力与耐药表型的共存；

（4）肺炎克雷伯菌毒力差异表型样本的比较分析；

第三部分：肺炎克雷伯菌的毒力实验方法

课时11：肺炎克雷伯菌毒力检测常用的实验方法

（1）毒力菌株的表型特征；

（2）常用实验方法及其检测对象；

（3）不同实验方法的适用场景或优劣；

（4）实验方法与组学方法的有效结合；

课时12：细菌黏液表型检测—拉丝试验与沉降试验

（1）细菌黏液的表型及其鉴定方法；

（2）拉丝试验的操作方法；

（3）沉降试验的操作方法；

（4）拉丝试验和沉降试验结果展示；

课时13：细菌荚膜产量检测—糖醛酸定量实验

（1）荚膜多糖与肺炎克雷伯菌毒力的关系；

（2）糖醛酸的提取和定量检测方法；

（3）糖醛酸的定量检测结果展示；

课时14：细菌致病杀伤能力检测—小鼠感染试验

（1）小鼠作为检测病原菌感染的模式生物；

（2）小鼠感染模型建立；

（3）动物感染模型致死实验的数据处理；

（4）小鼠感染模型毒力检测的示例；

课时15：细菌致病杀伤能力检测—大蜡螟幼虫感染试验

（1）大蜡螟作为检测病原菌感染的模式生物；

（2）大蜡螟幼虫感染模型建立；

（3）大蜡螟幼虫感染试验图像参考；

（4）大蜡螟幼虫感染模型毒力检测的示例；

课时16：细菌群体感应相关—生物膜形成试验

（1）生物膜的概念及其形成过程；

（2）生物膜形成试验方法；

（3）肺炎克雷伯菌生物膜形成试验的案例；

课时17：细菌抗免疫杀伤能力检测—中性粒细胞试验

（1）中性粒细胞的作用及与肺克毒力的关系；

（2）中性粒细胞的提取分离；

（3）中性粒细胞吞噬试验操作流程

（4）中性粒细胞杀菌试验操作流程；

（5）肺炎克雷伯菌中性粒细胞试验的案例；

课时18：分子遗传学—突变体构建

（1）基因突变简介；

（2）突变体的构建方法介绍；

（3）肺炎克雷伯菌突变体实验案例。